- 李骄;刘蒙蒙;王志;黄琪睛;鹿秀梅;
目的 运用高效液相色谱联用傅里叶变换离子回旋共振质谱法(HPLC-FT-ICR-MS)对中药复方大柴胡汤中的化学成分进行快速鉴别。方法 采用ZORBAX SB_C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm, 5μm),以乙腈-水(含体积分数0.1%甲酸)作为流动相进行梯度洗脱,流速为1.0 mL·min~(-1)。采用ESI源分别在正、负离子模式下采集数据。结果 根据化合物保留时间、精确分子量以及二级碎片离子信息,结合对照品和相关文献,在大柴胡汤中共鉴定出163个化合物,包括黄酮及其苷类88个,蒽醌类18个,单萜苷类16个,鞣质类10个,五环三萜类8个,苯丙素类8个,姜辣素类5个,其他10个。结论 运用HPLC-FT-ICR-MS技术能够快速、准确鉴定大柴胡汤化学成分,对该复方质量控制以及药效物质基础研究具有重要意义。
2023年11期 v.40;No.334 1417-1431页 [查看摘要][在线阅读][下载 1872K] [下载次数:1567 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:7 ] |[阅读次数:4 ] - 刘昊昆;王慧嘉;侯霞;许华容;李清;
目的 建立气相色谱-质谱联用(GC-MS)法同时测定福多司坦原料药中四种遗传毒性杂质3-氯-1-丙醇、1,3-二氯丙烷、3-氯丙酸乙酯和氯丙基羟丙基醚。方法 以氯苯为内标物,采用Agilent J&W VF-WAXms色谱柱(30 m×0.25 mm, 0.5μm),程序升温;离子源温度230℃,四极杆温度150℃,进样口温度220℃,流速1.0 mL·min~(-1),分流比2∶1;在离子选择(SIM)模式下,监控m/z 58.1、76.0、91.0、58.1和107.9离子进行检测。结果 3-氯-1-丙醇、1,3-二氯丙烷、3-氯丙酸乙酯和氯丙基羟丙基醚四种杂质分别在0.000 9~0.882 0μg·mL~(-1)、0.002 2~0.874 0μg·mL~(-1)、0.009 0~0.892 0μg·mL~(-1)和0.016 6~0.830 0μg·mL~(-1)范围内呈良好的线性关系(R~2≥0.999 9,n=5),检测限为0.264 0~4.980 ng·mL~(-1),定量限为0.880 0~16.60 ng·mL~(-1),平均回收率为89.2%~95.5%,重复性良好(RSD=0.30%~6.63%)。结论 该方法可作为福多司坦原料药遗传毒性杂质的质量控制方法。
2023年11期 v.40;No.334 1432-1438页 [查看摘要][在线阅读][下载 1563K] [下载次数:228 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:2 ] |[阅读次数:1 ] - 周胜楠;吴宿慧;孙志;包晓悦;王靖;李晓静;王霞;李根林;
目的 采用超高效液相色谱-四级杆/静电场轨道阱高分辨质谱技术(UHPLC-Q-Orbitrap HRMS)鉴定白术内酯I在大鼠体内的代谢产物,并探讨其可能的代谢途径。方法 SD大鼠单次灌胃给予白术内酯I后,收集大鼠血浆、尿液、粪便样品。以体积分数0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B)为流动相,梯度洗脱。在电喷雾电离源(ESI源)正、负离子模式下分析大鼠生物样本。根据质谱提供的准分子离子峰、碎片离子及准确相对分子质量,鉴定白术内酯I体内代谢产物。结果 共鉴定出大鼠体内代谢产物30个,其中血浆样品中5个,尿液样品中17个,粪便样品中16个。氧化、水合、脱饱和、硫酸化、葡萄糖醛酸化、甘氨酸结合、半胱氨酸结合等是白术内酯I体内主要的代谢途径。结论 首次阐明了白术内酯I在大鼠体内的代谢产物及代谢途径,为其进一步的药效学评价和开发利用提供参考,此外也为单体药物代谢产物鉴定提供了一种综合研究方法。
2023年11期 v.40;No.334 1439-1448+1557页 [查看摘要][在线阅读][下载 1985K] [下载次数:1023 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:3 ] |[阅读次数:1 ]
- 李茜;李永秋;张冬森;高轩;高海凤;
目的 羊栖菜多糖(SFPS)对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP~+)诱导的SK-N-SH损伤的影响及分子机制。方法 将SK-N-SH细胞用0.3 mmol·L~(-1)的MPP~+处理作为模型(Model)组;以正常培养的细胞作为对照(Con)组,用质量浓度分别为10、30、100 mg·L~(-1)的羊栖菜多糖和0.3 mmol·L~(-1)的MPP~+处理作为羊栖菜多糖低、中、高浓度组;将SK-N-SH细胞再分为Model+miR-NC组、Model+miR-7组、Model+SFPS-H+anti-miR-NC组、Model+SFPS-H+anti-miR-7组;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-7表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质印迹(Western blot)法检测蛋白表达;试剂盒检测细胞MDA含量、SOD活性和培养液中LDH含量。结果 不同浓度羊栖菜多糖处理后,MPP~+诱导的SK-N-SH细胞中miR-7表达水平升高,细胞的凋亡率降低,Bax表达水平降低,Bcl-2表达水平升高,MDA含量和LDH水平降低,SOD活性升高。过表达miR-7后,MPP~+诱导的SK-N-SH细胞的凋亡率降低,Bax表达水平降低,Bcl-2表达水平升高,MDA含量和LDH水平降低,SOD活性升高。抑制miR-7逆转了羊栖菜多糖对MPP~+诱导的SK-N-SH细胞损伤的作用。结论 羊栖菜多糖可能通过上调miR-7抑制MPP~+诱导的SK-N-SH细胞损伤。
2023年11期 v.40;No.334 1449-1455页 [查看摘要][在线阅读][下载 1363K] [下载次数:185 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:1 ] - 侯亚莉;梅稳;郭菲菲;贺明娟;吴国琼;夏婷;林梅;
目的 基于网络药理学筛选汉黄芩素治疗糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy, DR)的特征靶点和分子通路,并通过细胞实验对关键靶点进行初步验证,阐述汉黄芩素治疗DR的作用机制。方法 利用中药系统药理学数据库与分析平台(Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform, TCMSP)筛选出汉黄芩素的作用靶点,利用比较毒理学数据库(Comparative Toxicogenomics Database, CTD)、人类基因功能和网络分析数据库(Human Gene Function and Network Analysis Database, GenCLiP)、DisGeNET和GeneCards数据库筛选出DR的相关作用靶点,利用STRING数据库及Cytoscape 3.6.1软件构建蛋白相互作用网络(Protein-Protein-Interaction-Network, PPI),利用注释可视化和集成发现数据库(Database for Annotation Visualization and Integrated Discovery, DAVID)对靶点进行基因本体(Gene Ontology, GO)注释和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes, KEGG)信号通路富集分析。最后通过汉黄芩素干预高浓度D-葡萄糖诱导ARPE-19细胞病变模型实验初步验证相关通路中的核心靶点,在光镜下观察细胞形态,用细胞增殖及毒性检测试剂盒(cell counting Kit-8,CCK8)检测细胞存活率,采用实时荧光定量聚合酶链反应(real time quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR)法分析靶点基因的表达量。结果 筛选出汉黄芩素的潜在靶点204个,与DR相关的靶点313个,汉黄芩素靶点与DR靶点交集后获得30个核心靶点。GO富集分析显示,汉黄芩素主要涉及渗透胁迫响应、膜筏和胰岛素受体底物结合等生物过程。KEGG靶点分析显示,糖尿病并发症的晚期糖基化终末产物-晚期糖基化终末产物受体(advanced glycation end-advanced glycation end receptor, AGE-RAGE)、内分泌抵抗、表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)酪氨酸激酶抑制剂抵抗和白细胞介素-17(interleukin-17,IL-17)等信号通路基因富集较多。最后,通过体外ARPE-19细胞实验成功验证糖尿病并发症的AGE-RAGE信号通路中蛋白激酶B(protein kinase B,AKT1)、B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma 2,BCL2)和胱天蛋白酶3(caspase-3,CASP3)是重要靶点,提示汉黄芩素对DR有显著改善作用。结论 利用网络药理学揭示了汉黄芩素通过多靶点、多通路的形式治疗DR疾病,通过体外细胞实验成功验证了AGE-RAGE信号通路中的核心靶点,为进一步阐释汉黄芩素治疗DR的作用机制提供了科学依据。
2023年11期 v.40;No.334 1456-1465页 [查看摘要][在线阅读][下载 1993K] [下载次数:945 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:10 ] |[阅读次数:1 ] - 其其格;夏丽华;任睿;
目的 探讨地黄多糖对缺氧/复氧(H/R)诱导的人肾小管上皮细胞氧化应激和细胞凋亡的影响及可能机制。方法 体外培养人肾小管上皮细胞HK-2,用不同剂量(10、20、40μg·mL~(-1))地黄多糖干预HK-2细胞24 h后,建立H/R模型(缺氧6 h,复氧12 h),试剂盒检测细胞中MDA含量及GSH-PX和SOD活性,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法检测cleaved-caspase3和cleaved-caspase9蛋白表达,qRT-PCR检测细胞中miR-216a表达。转染miR-216a模拟物或抑制剂至HK-2细胞后,建立H/R模型,上述相同方法检测细胞氧化应激水平和凋亡情况。结果 与H/R组比较,地黄多糖降低H/R诱导的HK-2细胞中MDA含量、凋亡率、蛋白(cleaved-caspase3、cleaved-caspase9)表达(P<0.05),而提高GSH-PX和SOD活性(P<0.05)。同时,地黄多糖促进了H/R诱导的HK-2细胞中miR-216a的表达(P<0.05)。上调miR-216a降低H/R诱导的HK-2细胞中MDA含量、凋亡率、蛋白(cleaved-caspase 3、cleaved-caspase 9)表达(P<0.05),而提高GSH-PX和SOD活性(P<0.05)。下调miR-216a逆转地黄多糖对H/R诱导的HK-2细胞氧化应激和凋亡的影响。结论 地黄多糖可能通过上调miR-216a抑制H/R诱导的HK-2细胞氧化应激和凋亡。
2023年11期 v.40;No.334 1466-1472+1576页 [查看摘要][在线阅读][下载 1719K] [下载次数:343 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:11 ] |[阅读次数:1 ] - 许铭珊;孙晶;杨洁;朱雨欣;朱博;徐文娟;董玲;
目的 优选提取工艺制备鲜参组方的生脉冻干口崩片,评价鲜参中优势皂苷类成分的药理作用,为鲜参入药制剂的合理应用提供参考。方法 制备鲜参乙醇提取物、匀浆及煎煮提取物以及不同人参炮制品组方的生脉冻干口崩片,采用UPLC-Q-Exactive MS技术对皂苷类成分进行分析鉴定。利用PharmMapper预测目标皂苷类成分潜在靶点,利用String及DAVID对潜在靶点进行蛋白相互作用、GO过程及KEGG功能富集分析,运用Cytoscape软件构建成分-靶点-通路网络,应用AutoDock软件进行分子对接验证。结果 优选匀浆工艺制备生脉冻干口崩片,比较不同炮制品组方中皂苷含量的差异,筛选出malonylginsenoside Rb_2、malonylginsenoside Rc、malonylginsenoside Rb_1、malonylginsenoside Rd、ginsenoside Re、ginsenoside Rf作为优势成分。通路富集结果表明,鲜参中的丙二酸单酰基类皂苷成分主要调控糖基化终末产物-糖基化终末产物受体(advanced glycation end products-receptor advanced glycation end products, AGE-RAGE)、白细胞介素17(interleukin-17,IL-17)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor, TNF)等信号通路。malonylginsenoside Rc是关键的丙二酸单酰基类皂苷成分,丝裂原活化蛋白激酶14(mitogen-activated protein kinase 14,MAPK14)、半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3,CASP3)、人转化生长因子β受体1(TGF-beta receptor type-1,TGFBR1)、骨形态发生蛋白-2(bone morphogenetic protein 2,BMP2)为其潜在的关键靶点,相关结果得到分子对接的验证。结论 匀浆工艺能够有效保留鲜参中的丙二酸单酰基类皂苷成分,该类成分可通过调控AGE-RAGE、IL-17、TNF等信号通路以调节机体的炎症、细胞凋亡等反应过程,主要涉及糖尿病型并发症、动脉粥样硬化、肿瘤等疾病过程。鲜参中皂苷类优势成分的筛选为鲜参的质量控制提供参考依据,结合匀浆工艺制备的生脉冻干口崩片为后续鲜参在制剂开发应用中奠定经验基础,同时为临床中药鲜用提供理论依据。
2023年11期 v.40;No.334 1473-1485页 [查看摘要][在线阅读][下载 2341K] [下载次数:306 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:2 ] |[阅读次数:1 ]